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层析柱安装的每一个步骤都很关键News

层析柱安装的每一个步骤都很关键
发布时间:2016-12-22 点击次数:2879次
 层析柱安装的每一个步骤都很关键
层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,从而分离的一种层析法。层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外, 直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞,一般不超过1米。分族分离时用短柱,一般凝胶柱长20-30厘米,柱高与直径的比较5:1─10:1,凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。 分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1,常用凝胶柱有50×25厘米,10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小,如果支掌滤板下的死体积大,被分离组分之间重新混合的可能性就大,其结果是影响洗脱峰形,出现拖尾出象,降低分辩力。在分离时,死体积不能超过总床体积的1/1000。
简述层析柱的安装流程:
1、检测层析柱的各个部件,确保干净、完整,拧上下端堵头,拧紧膨胀圈,然后将层析柱垂直 固定在铁架台上,将装柱器安装在层析柱上端。  
2、往层析柱中加入适量的20%乙醇,打开下端口,重力流,排除下筛网中滞留的气泡,在液面 低至1-2cm高度时关闭层析柱下端出口。
3、用玻璃棒紧靠柱子内壁引流,将摇匀的介质加入到层析柱中,这可以减少气泡的产生。迅速 用20%乙醇填满柱子和装柱器,装上装柱器盖子,连接到?KTA上。
4、打开层析柱下端,开始以30cm/h流速装柱,直至柱床界面平稳,停止装柱,打开装柱器盖子,用虹吸法去除界面上端的液体,去掉装柱器,然后小心的用20%乙醇封满 柱子剩余部分。
5、拧紧膨胀圈,继续用装柱流速压柱,至少保持3个柱体积,以界面不变为主,在界面处做上记号,关闭泵,并关闭柱子下端出口,使层析柱上端和泵断开(转接器上接口是打开的),略拧松 膨胀圈,缓慢向下转动调节杆,到记号处停止,然后再拧紧膨胀圈,关闭上接口。
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